林业科学

作者：冯莹1,林庆良2,潘东明2

单位：1. 泉州师范学院资源与环境学院 泉州 3620002. 福建农林大学 福州 350002

关键词：青钱柳,愈伤组织,离体保存,渗透调节剂,生长抑制剂

基金：福建省科技厅引导性项目(2017N0028);泉州市科技计划项目(2018N007)

目的: 在优化植物激素的基础上，通过添加渗透调节剂和生长抑制剂，探索青钱柳愈伤组织离体保存的方法，为青钱柳种质资源的长期离体保存提供理论依据和技术支撑。方法: 以青钱柳愈伤组织为试验材料，采用二因素完全随机法优化培养基内6-BA（0.4、0.6、0.8、1.0 mg·L-1）+IBA（0.2、0.4 mg·L-1）浓度组合；在此基础上，采用单因素完全随机法，针对不同蔗糖浓度（30、45、50、55、60 g·L-1）及其保存时间（60、90、120、150、180天）、不同渗透调节剂浓度（甘露醇：0、10、20、30、40、50 g·L-1；肌醇：0、10、20、30、40、50 g·L-1）及不同生长抑制剂浓度（多效唑（PP333）：0、2、4、6、8、10 mg·L-1；丁酰肼（B9）：0、2、4、6、8、10 mg·L-1）开展愈伤组织离体保存试验。在保存过程中，结合流式细胞术和SSR分子标记技术，检测不同保存代数下愈伤组织的细胞倍性和遗传稳定性，并对保存第15代的愈伤组织进行恢复生长试验。结果: 通过对6-BA+IBA浓度组合、渗透调节剂、生长抑制剂的筛选，改良MS+0.8 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1IBA+45 g·L-1蔗糖+6.0 g·L-1琼脂粉（pH5.8）是适宜的青钱柳愈伤组织离体保存培养基，该培养基可有效地限制青钱柳愈伤组织生长；90天为适宜的继代保存时间，愈伤组织存活率为100%；愈伤组织呈黄绿色，颗粒状、颗粒小且疏松。与对照组（叶片）相比，不同保存代数下愈伤组织的细胞倍性没有发生改变，遗传稳定性好。保存的愈伤组织均能恢复生长，在形态、生活力和生长势方面表现好，并能够分化。结论: 适宜的青钱柳愈伤组织离体保存的培养基为改良MS基本培养基+0.8 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1IBA+45 g·L-1蔗糖+6.0 g·L-1琼脂粉，pH5.8，在（20±1）℃下每隔90天转接1次，是青钱柳愈伤组织离体保存继代的最佳途径；保存的愈伤组织遗传稳定性好、未发生变异。甘露醇、肌醇、多效唑和丁酰肼等添加剂均不利于青钱柳愈伤组织的离体保存。

来源：2020年第9期

《林业科学》期刊编辑部

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