林业科学

作者：贺然1,2,崔夏2,应玥1,曲良建1,*,王瑞珍2,张永安3

单位：1. 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 国家林业和草原局森林保护学重点实验室 北京 1000912. 北京市植物园 北京市花卉园艺工程技术研究中心 北京 1000933. 中国林业科学研究院华北林业实验中心 北京 102300

关键词：球孢白僵菌,松褐天牛成虫,菌株筛选鉴定,生物防治

基金：中国林科院基本科研业务费专项资金(CAFYBB2018ZB005);国家自然科学基金项目(31800547)

目的: 筛选对松褐天牛成虫具有高致病力的白僵菌菌株，以期用于防治松褐天牛成虫。方法: 收集被病原真菌感染的松褐天牛幼虫，25℃条件下PDA培养基培养分离纯化病原真菌。使用25℃、相对湿度60%、光周期16 L：8D条件下羽化5~10天的健壮松褐天牛成虫，生物测定病原真菌致死效果。将PDA培养基上培养获得的病原真菌孢子，分别溶于0.05%的吐温80溶液中，配制成终浓度分别为1×106~3×106或者1×106~3×107个·mL-1的孢子悬浮液，0.05%的吐温80溶液作为空白对照。采用涂枝法和喷洒法处理松褐天牛成虫，以累计校正死亡率为指标评价菌株的致病力。折线图由R包"ggplot2"绘制。采用ITS1和ITS4扩增真菌保守序列，经连接转化后测序。采用软件muscle比对序列，MEGA软件中的最大似然法构建系统发育树。结果: 从感染的23头松褐天牛幼虫中共分离出23株白僵菌菌株，通过喷洒法初步筛选出18天累计校正死亡率在30%以上的6个菌株。选取B7和B92个产孢量大（14天，108·cm-2）的菌株，涂枝法进行毒力测试结果表明，B9菌株在12天的累计校正死亡率即可达到100%，而B7菌株在12天时的累计校正死亡率约为50%±10%，B9菌株的致死速率显著高于B7菌株。ITS扩增及测序结果表明与球孢白僵菌的同源性为99%。系统发育树结果也表明B9菌株与球孢白僵菌聚为同一分支上。结合形态、NCBI Blast比对结果和系统发育树共同确定B9菌株为球孢白僵菌。结论: 本研究得到对松褐天牛成虫高毒力的球孢白僵菌菌株，对于防治松褐天牛具有良好的应用前景，但实际应用价值需要进一步的田间试验进行确认。

来源：2020年第10期

《林业科学》期刊编辑部

查看林业科学杂志2020年第10期