林业科学

作者：李茜雅,张盛培,李河*

单位：经济林培育与保护省部共建教育部重点实验室 中南林业科技大学 长沙 410004

关键词：油茶,果生刺盘孢,CfVps26,致病力

基金：国家自然科学基金项目(32071765)

目的: 研究液泡分选蛋白Vps26在油茶果生刺盘孢中的生物学功能，为阐明Vps26的作用机制和防治油茶炭疽病提供理论依据。方法: 采用Over-lap法构建CfVPS26基因敲除载体片段，利用PEG介导的转化法将该片段转入果生刺盘孢原生质体中，对具有潮霉素抗性的转化子进行验证筛选；PCR扩增启动子在内的CfVPS26基因回补片段，构建回补质粒并转入突变体原生质体中，荧光筛选回补菌株；对野生型菌株、突变体和回补菌株进行营养生长、附着胞形成率、细胞壁胁迫、糖原染色及致病力等生物学表型测定。结果: 筛选验证获得CfVPS26基因缺失突变体ΔCfvps26；该突变体生长速率均显著小于野生型菌株和回补菌株，气生菌丝也明显减少；在含有细胞壁抑制剂200 μg·mL-1荧光增白剂和0.01%十二烷基硫酸钠的PDA培养基中，突变体ΔCfvps26生长抑制率显著高于野生型和回补菌株的抑制率；在含有内质网胁迫剂二硫苏糖醇的PDA培养基中，突变体菌株ΔCfvps26耐受性增强，抑制率显著低于野生型和回补菌株。进一步研究发现，CfVPS26基因缺失突变体分生孢子产量和附着胞形成率显著降低、糖原的代谢受阻，无法在油茶叶片上形成病斑，致病力丧失。结论: 液泡分选蛋白CfVps26参与调控油茶果生刺盘孢生长发育、产孢、附着胞形成、外界胁迫、糖原代谢和致病过程。本研究可为阐明CfVps26参与调控果生刺盘孢致病的分子机制提供参考，并为新型杀菌剂的开发提供潜在靶标位点。

来源：2021年第8期

《林业科学》期刊编辑部

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