林业科学

作者：戴晓港,陈晨,薛良交,吴怀通,尹佟明*

单位：江苏省杨树种质创新与品种改良重点实验室 南京林业大学 南京 210037

关键词：美洲黑杨,小叶杨,种间杂交,物种特异性引物,分子鉴别

基金：江苏省(现代农业)重点研发项目(BE2021366);国家自然科学基金项目(31500533)

目的: 针对杨树种间杂交子代苗期形态不易区分的问题，利用美洲黑杨和小叶杨物种特异性InDel位点开发标记对种间杂交子代进行快速鉴别，为黑杨派和青杨派种间杂交子代鉴定、分子标记辅助育种等研究提供重要的参考技术。方法: 以美洲黑杨、小叶杨及其杂交子代为试验材料，根据美洲黑杨和小叶杨重测序结果分析物种特异性InDel位点并设计引物，采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对引物进行通用性和物种特异性检测，用筛选出的物种特异的引物，对种间杂交子代的真实性进行鉴别。结果: 分别将10个个体的美洲黑杨和小叶杨重测序序列比对到美洲黑杨基因组，共获得长度差异大于5 bp的InDel位点359 733个，其中种内特异、种间存在差异的InDel位点18 418个。采用Primer3在美洲黑杨基因组中的17 956个位点成功设计引物。在不同染色体共选取10对引物，采用SeqHunter2将引物序列比对到小叶杨基因组，共有6对引物在小叶杨中是通用的。采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，发现引物Psi2-1和Psi13-14在美洲黑杨和小叶杨中存在差异。利用美洲黑杨和小叶杨自然群体各50个个体对上述2个引物进行检测，发现引物Psi2-1在美洲黑杨中扩增出128 bp的特异性产物，在小叶杨中扩增出139 bp的特异性产物，在真实的种间杂交子代中扩增出128 bp和139 bp 2条产物；引物Psi13-14在美洲黑杨中扩增出132 bp的特异性产物，在小叶杨中扩增出144 bp的特异性产物，在真实的种间杂交子代中扩增出132 bp和144 bp 2条产物。2对引物对美洲黑杨与小叶杨种间杂交子代鉴别准确率达100%。结论: 获得了美洲黑杨和小叶杨物种特异性InDel标记2对，上述标记可以有效地用于美洲黑杨与小叶杨种间杂交子代的真实性鉴别。

来源：2021年第11期

《林业科学》期刊编辑部

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