林业科学

作者：方林鑫,李志红,张守科,张威,舒金平*,王浩杰

单位：中国林业科学研究院亚热带林业研究所 杭州 311400

关键词：黄脊竹蝗,内参基因,基因筛选,荧光定量PCR

基金：国家自然科学基金面上项目(31670660)

目的: 基于黄脊竹蝗若虫不同龄、成虫不同性别及不同组织筛选稳定表达的内参基因, 为黄脊竹蝗后续转录调控研究提供参考。方法: 依据黄脊竹蝗转录组测序结果, 以TUB、RPS27A、RPL10、AK、GAPDH、EF1A、RPS3、Actin和18S rRNA常用的9种昆虫内参基因作为候选, 本地Blast后获得碱基序列并设计引物。利用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件分析这9种内参基因的稳定性, 筛选出在若虫不同龄、成虫不同性别与不同组织(触角、头、唇须、肌肉组织、精/卵巢)中表达量最为稳定的内参基因。结果: 9种候选内参基因在黄脊竹蝗体内均为首次验证并报道, 且与其他昆虫相应基因同源性高(高于70%), 差异值小; 9种候选内参基因的引物均具有良好的扩增效率(均在90%~120%); 在所有样品中, 18S rRNA表达水平最高(Ct = 10.78 ± 2.58, P < 0.05), Actin表达水平差异值最大(Ct = 23.55 ± 3.84, P < 0.05)。黄脊竹蝗不同龄若虫的内参基因稳定性分析时, 3个软件排在前2位的内参基因均为RPS3与RPL10; 基于不同组织分析时, GeNorm与BestKeeper软件表明RPL10是最合适内参基因, 而NormFinder软件则表明GAPDH为最合适内参基因; 在黄脊竹蝗成虫不同性别分析时, 3种软件评估结果均表明GAPDH和RPL10为合适内参基因。结论: 筛选出RPL10为在不同条件下于黄脊竹蝗体内表达稳定并具有差异性的基因, 可作为黄脊竹蝗转录组学及功能基因组学研究的内参基因。

来源：2022年第1期

《林业科学》期刊编辑部

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