林业科学

作者：耿显胜1,赵誉霞1,贾小琦1,彭嫔嫔2,张威1,舒金平1,*

单位：1. 中国林业科学研究院亚热带林业研究所　 杭州 3114002. 浙江林信林业技术服务有限公司　 杭州 311400

关键词：雷竹,夜蛾,引物,多重PCR,DNA条形码

基金：浙江省科技计划项目公益技术应用研究类（LGN21C160011）

目的: 建立鉴定竹笋夜蛾物种的多重PCR技术，用于浙江省笋用竹的3种竹笋夜蛾幼虫的物种鉴定。方法: 针对COI基因的变异区设计物种特异性多重PCR引物；优化影响多重PCR反应的参数，建立鉴定竹笋夜蛾的多重PCR技术；采用标准DNA模板评价多重PCR技术的敏感性和特异性；利用多重PCR技术对林间采集的竹笋夜蛾幼虫进行物种鉴定。结果: 针对3种竹笋夜蛾COI基因的变异区设计了3条物种特异性多重PCR引物，与通用引物LCO1490配合使用，扩增竹笋基夜蛾、竹笋禾夜蛾和笋秀夜蛾COI基因片段，大小分别为290、390和590 bp。优化后的多重PCR鉴定技术的反应体系为：2×HotStart Taq PCR预混试剂10 μL，10 μmol·L?1的引物LCO1490、JYE290、HYE390和QTYE590各0.5 μL，DNA模板1 μL，加ddH2O补足20 μL。优化后的多重PCR鉴定技术的反应条件为：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，59 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s；72 ℃下延伸10 min，循环数为35。多重PCR鉴定技术对笋秀夜蛾的最低检出限为0.01 ng·μL?1，对竹笋禾夜蛾和竹笋基夜蛾的最低检出限低于0.001 ng·μL?1。林间样品鉴定结果表明，所有38份DNA都能扩增出明显的特异性条带，鉴定成功率100%；经测序验证，本研究的技术鉴定的物种与经COI基因序列鉴定的物种一致。结论: 研究建立了浙江省笋用竹的夜蛾的多重PCR鉴定技术，能够快速高效鉴定浙江省笋用林内竹笋夜蛾幼虫的物种，该技术具有鉴定周期短、灵敏度高、特异性强、准确度高等优点。

来源：2024年第10期

《林业科学》期刊编辑部

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